01

造成前沿峰的原因

1. 柱过载

每一根色谱柱都有其最大样品承载量,当样品量过多时会出现超载现象,包括质量过载和体积过载。

2.色谱柱损坏

色谱柱在长时间使用之后就会导致硅胶填料的溶解,柱床崩解,从而柱效降低导致峰前沿。

3.峰干扰

两个化合物共洗脱,即在大峰前有小峰出现,色谱峰没有分开。

4.样品溶剂的影响

当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰。

具体就是说,样品在色谱柱中均匀的往前移,我们通常会得到呈正态分布的的峰。当样品溶液进样后到达色谱柱的时间比较短,在未被流动相充分稀释时,由于洗脱能力比较强的样品溶剂存在,使部分样品被洗脱的速度加快,快速通过色谱柱,最终导致峰前延。

中药成分分析项目中,提取溶剂通常为乙醇、甲醇、乙酸乙酯等洗脱强度较强的溶剂,此时易发生“样品溶剂的洗脱强度远远超过流动相”的情况,为避免前延峰出现,可以用通过“流动相稀释提取液”或降低“进样体积”的方式。

02

应用案例

蒡子的含量测定

色谱条件:

色谱柱:Ultimate® AKL-C18(4.6×250mm,5μm)。

流速:1.0mL/min;

流动相:甲醇:水=1:1.1;

检测波长:280nm;

柱温:30℃;

进样体积:10μL。

色谱图:

(1) 标准品

结论:牛蒡苷峰形前沿,将进样体积降低至5μL,结果如下:

(1) 标准品

(2) 供试品

结论:通过降低进样体积有效改善了牛蒡苷的峰形,结果可满足《中国药典2020版》中相关要求。

03

产品信息